بهینه سازی بیان تولید پروتئین نوترکیب PapG.AcmA در ﺳﻮﯾﻪ بیانی اﺷﺮﯾﺸﯿﺎ ﮐﻠﯽ

سابقه و هدف: اشریشیا کلی یوروپاتوژن (UPEC) یکی از مهمترین باکتری های بیماری زاست که باعث عفونت مجاری ادراری می شود و هنوز هیچ واکسن انسانی علیه آن ساخته نشده است. هدف از این مطالعه، ﺑﻬﯿﻨﻪ ﺳﺎزی بیان پروتئین ﻧﻮﺗﺮﮐﯿﺐ PapG  به همراه پروتئین لنگری لاکتوباسیلوس به نام AcmA در اشریشیا کلی می باشد. ﻣﻮاد و روشﻫﺎ: ژن کدکننده PapG.AcmA در وکتور کلونینگ pEXA به صورت سنتتیک خریداری و در وکتور بیانی pET21a ساب کلون گردید. ﺑﯿﺎن ﭘﺮوﺗﺌﯿﻦ نوترکیب در میزبان بیانی اشریشیا کلی سویه اریگامی با روش SDS-PAGE و وسترن بلات مطالعه شد. تولید پروتئین فیوژن در مقیاس بالا تحت تاثیر ﺗﺮﮐﯿﺐ ﻣﺤﯿﻂ ﮐﺸﺖ، ﻏﻠﻈﺖﻫﺎی ﻣﺨﺘﻠﻒ IPTG به ﻋﻨﻮان اﻟﻘﺎﮔﺮ و زﻣﺎن اﻟﻘﺎ در ﺑﯿﺎن پروتئین ﻧﻮﺗﺮﮐﯿﺐ PapG.AcmA  بهینهﺳﺎزی گردید. ﯾﺎﻓﺘﻪﻫﺎ: با توجه به نتایج ﺑﻬﺘﺮﯾﻦ بیان در مقیاس بالا، ﺗﻮﺳﻂ ﻏﻠﻈﺖ 0.1 میلی مولار IPTG در ﮐﺪورت ﻧﻮری  OD600nm برابر با 3 تعیین ﺷﺪ. ﻣﺤﯿﻂ ﮐﺸﺖ ﭘﯿﭽﯿﺪه اﺻﻼح ﺷﺪه ﺣﺎوی گلوکز (6 گرم بر لیتر)، عصاره مخمر (20 گرم بر لیتر)، تریپتون (10 گرم بر لیتر)، KH2PO4 (2.3 گرم بر لیتر) و K2HPO4 (12.5 گرم بر لیتر) ﺑﻪ ﻋﻨﻮان ﻣﺤﯿﻂ ﮐﺸﺖ ﺑﻬﯿﻨﻪ ﺗﻌﯿﯿﻦ ﮔﺮدﯾﺪ. ﺑﯿﺸﺘﺮﯾﻦ ﻣﻘﺪار ﺗﻮﻟﯿﺪ ﺑﯿﻮﻣﺲ و ﺑﯿﺎن ﭘﺮوﺗﺌﯿﻦ ﻫﺪف در ﻣﺤﯿﻂ ﮐﺸﺖ ﺑﻬﯿﻨﻪﺳﺎزی ﺷﺪه ﺑﻪ ﻣﯿﺰان  OD600nm برابر با 5.5 ﺗﻌﯿﯿﻦ شد. ﻧﺘﯿﺠﻪﮔﯿﺮی: نتایج نشان داد که کلون سازی و بیان ژن PapG.AcmA قابل انجام می باشد. همچنین اﺳﺘﻔﺎده از ﻣﻨﺒﻊ ﮐﺮﺑﻦ ﮔﻠﻮﮐﺰ در ﺗﺮﮐﯿﺐ ﻣﺤﯿﻂ ﮐﺸﺖ ﭘﯿﭽﯿﺪه ﻧﺴﺒﺖ ﺑﻪ ﻣﺤﯿﻂ ﮐﺸﺖ LB بیان ﺑﻬﺘﺮی ﻣﯽدﻫﺪ. در نهایت با تخلیص و ارزیابی ایمنی زایی پروتئین نوترکیب، می توان از آن به عنوان یک کاندیدای واکسن استفاده نمود.